http://dendrites.blog.tianya.cn/ Dendrites dendrites 2008-5-16星期五(Friday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=13859227&idWriter=0&Key=0 我不鼓励捐款攀比，捐的少的不一定小气，但捐的多的一定是为国为民！台湾同胞与我们骨肉相连！

彻底明白支持国产的意义 5月15日更新

转贴： （不完全摘录）
捐款的企业明细----> 国美电器700万，交通银行1200万，苏宁电器500万，招商银行
800万，新希望500万，中国平安500万，中国人寿1600万，泛海建设1000万，中国建行
2000万，中国工行1200万，中国银行1000万，民生银行1000万，南方航空1000万，中国
石化1000万，中远集团1000万，三一重工1800万，长虹652万，海信集团600万，浦发银
行500万，哈药集团500万，伊利集团100万，宇通客车100万，仁和集团300万，TCL集团
100万，长江证券100万，中石油1000万及成品油10万吨，江淮汽车200辆车，华北制药
100万，格力电器800万，雅戈尔 500万，新湖创业 1000万，上海汽车1000万，北汽集
团1000万，山西汾酒50万，海信600万，青岛啤酒100万，绵世股份50万，*st中绒50万
，光明乳业100万，健康元500万，中国远洋1000万，一汽集团1000万+四辆车，st科龙
600万，燕京啤酒300万，保利地产30万，三全食品100万，鱼跃医疗50万，*st中绒50万
，云南白药190万，万科220万，山河智能500万，中联重科设备援助，宏源证券80万，
东方证券200万 ， (5月15日更新) 华为500万， 诺基亚300万，索尼100万，三星3000万。

去网上看看每个企业的捐款数额，
现在彻底明白支持国产的意义
大家平常都支持的 诺基亚 三星 索尼 都死到哪里去了 (更新数据：三星和诺基亚还不错，索尼shit)
妈的钱在自己的国人手中才是硬道理
从现在开始彻底支持国产
从我做起，请转发给你所有的群

那些在各种高峰论坛上慷慨激昂的跨国公司CEO没有出现，那些在纸醉金迷的中国都市
里奋勇吸金的跨国奢侈品巨头也没有出现，LV在沉默，戴尔DELL在沉默，SONY在沉默、
东芝在沉默、肯德基在沉默、没有声音，没有行动。
没有任何一条中国法律强制LV们在这个时候必须捐助，但在道德准则上，我实在想不通
，他们用什么来支撑自己的品牌价值，媒体、舆论和消费者对这些跨国企业都太宽容了
，把他们宠坏了。一个没有庞大消费者压力的中国市场，那真是跨国公司忽悠利润的乐
土。
恳切大家务必转发


搜狐财经号召企业积极行动救助四川地震灾区
[台塑集团1亿元人民币 台湾鸿海捐6000万] [台资富士康6000万]
[大润发捐5000万] [李嘉诚基金会3000万] [中国网通捐2500万]
[中国银行捐2300万] [益海嘉里捐2000万] [建设银行捐2000万]
[古伊泰2000万] [中国人寿1600万] [赛诺菲安万特捐1500万元]
[中石油集团捐1000万元及成品油10万吨] [农业银行捐1500万元]
[交通银行1200万] [工商银行1200万] [水井坊帝亚吉欧1200万]
[华侨城1100万] [海尔捐1000万] [联想1000万] [比亚迪1000万]
[上汽集团1000万] [一汽与丰田捐1000万] [人保慈善捐1000万]
[辉瑞公司捐1000万] [四川蓝光捐1000万] [民生银行捐1000万]
[中煤集团捐1000万] [神华集团捐1000万] [中国石化捐1000万]
[兴业银行捐1000万] [中国中化捐1000万] [吉利集团捐1000万]
[中海油捐1000万元] [复星集团捐1000万] [泛海控股捐1000万]
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印尼海啸的捐款名单和此次地震捐赠对比： 更新日期2008年5月15日，

1、联想集团捐款50万美元 （本次1000万，联想好样的，我们支持你）
2、华硕捐赠金额2500万人民币（本次地震仅仅捐献了300万，华硕难道认为印尼的市场
比我中国市场重要10倍？）
3、丁磊个人捐款120万美元(折合人民币1000万元)，（但是你整个网易这次才捐了500
万，丁磊你怎么想的？）
4、陈天桥及盛大为海啸灾区捐赠100万元人民币（本次地震也是100万，盛大我以后绝
对不玩你的游戏，我说真的， 丫们不是还在美国上市了吗）
5、TCL捐了300万人民币（本次地震100万，好了 TCL给我们中国人一个支持你的理由？你能告诉我们么？）
6、华为捐了300万人民币（更新注：华为这次500万）
7、中兴捐了300万人民币（更新注：中兴这次1000万，实力虽不如华为，但是比华为强！）
8、微软捐款350万美金 （2次一共给地震灾区捐了200万，我看微软你真的做错了，我
们还需要用的正版么？）
9、三星为印度洋海啸捐款300万美金 （更新注：这次3000万人民币，不错！）
10、思科为海啸受灾地区捐款逾250万美元 （还没有捐款，我希望思科你不是一个短视
的小丑）
11、摩托罗拉全球逾250万美元 （地震捐200万RMB，moto你真的有点过分，更新注：诺基亚300万人民币，4500部手机，以后用诺基亚了）
12、戴尔与苏珊基金会周五将向受灾国捐赠300万美元（更新注：戴尔这次210万人民币，shit!）
13、　沃尔玛在超市内设置了募捐箱，同时沃尔玛基金会也捐赠了200万美元（哇，真的不少 给我们捐了300万RMB，是不是有一天你也该滚出中国。更新注：其实walmart雪灾的时候2月5日捐了100万美元，还不是那么吝啬 ）
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另附，汽车行业
奔驰捐款40万人民币，宝马100万，而吉利是1000万元！！！！
各合资厂商非常慷慨，一汽丰田，大众，现代起亚，飞亚迪，广本等。
在中国买奔驰宝马就是卖国！
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车企业捐助金额一览表：
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捐助时间 企业名称 捐助情况
13日10:04 宇通客车 向灾区捐100万元财物
13日10:20 长城汽车 捐助20辆车开往一线
13日11:00 戴姆勒 向灾区人们捐款40万元 （奔驰）
13日11:23 华晨汽车 捐赠20辆车价值280万元
13日11:53 江淮汽车 捐赠总价值200万元的车辆
13日12:39 东风日产 捐赠10辆逍客SUV
13日14:16 广州本田 向震区捐款100万元
13日15:56 陕汽集团 捐赠款物累计超100万
13日16:44 奇瑞汽车 捐20辆瑞麒2、10辆瑞虎3
13日17:01 标致雪铁龙 向受灾地区捐赠100万元
13日18:55 一汽与丰田 向受灾地区捐赠1000万及10辆车
13日18:56 上海通用＋上汽通用5菱＝通用合资企业 向受灾地区捐赠600万元
13日18:58 大众、一汽大众、上海大众 向受灾地区捐赠600万元
13日19:27 神龙汽车 向灾区捐赠现金100万元
13日19:28 东风Honda 捐献100万现金和两台CR-V
13日19:33 米其林 向地震灾区捐款50万元
13日19:33 宝马 向灾区捐助100万元
13日19:37 康明斯 捐款100万元人民币
13日20:40 风行汽车 支援车队提供物资
14日09:25 华菱汽车 捐款100万元
14日09:26 比亚迪 捐助1000万元现金
14日09:46 上汽集团 捐助400万元
14日10:15 长安福特马自达 捐款150万元
14日11:11 东南汽车 10辆得利卡救护车
14日11:15 现代起亚 捐助1050万及5辆途胜6辆狮跑
14日11:23 通用汽车 捐款200万人民币
14日11:27 普利司通 捐款30万用于抢险救灾
14日11:35 海马汽车 捐赠10台普力马
14日11:40 力帆集团 捐款200万元
14日11:48 东风柳汽 10台自卸车
14日12:00 吉利集团 首批捐款1000万元
14日12:23 长安铃木 向灾区捐赠120万元
14日13:31 海辰机构 捐赠30万人民币
14日13:51 天津一汽 捐助十所博爱卫生院
14日14:01 广州丰田 捐助100万元人民币
14日15:19 长安集团 向地震灾区捐助350万元
14日15:37 斯巴鲁 向受灾地区捐款100万元
14日15:39 日产汽车 向地震灾区捐款101万
14日15:54 长丰汽车 捐100万在灾区建希望小学
14日16:45 福特汽车 与在华投资企业共同捐赠500万
14日16:54 江铃汽车 捐赠366万款物
14日16:55　 福田汽车 捐款捐物超100万
14日17:03 广本携全国4S店及员工 再次捐款1103万
14日17:06　 哈飞汽车 捐赠价值100万元的10辆赛豹
14日17:19　 燕宝汽车 下属成员共计捐款45万
14日18:44 郑州日产 捐赠110万元物款 ]]> 2008-5-16 1:57:00(0) dendrites 2008-4-10星期四(Thursday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=13358479&idWriter=0&Key=0 　　http://laiba.tianya.cn:80/laiba/AlbumListL?uid=8938246046474121508
　　
　　同志们，朋友们，到我的相册里面来看奥运圣火传递！
　　
　　火炬传万里，中华当自强！]]> 2008-4-10 14:07:00(0) dendrites 2008-4-9星期三(Wednesday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=13339790&idWriter=0&Key=0 



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　作者：法兰西游侠　回复日期：2008-4-8　1:06:56　
　　　　转一个留学生的话：
　　　　
　　　　中午去了现场，心情沉重，更打了暴徒份子
　　　　在这个不是中国的地盘上，zd支持者们和反奥运者可以表达自己的意见，愿意在各国记者的摄像机前展示也没有人拦着；就像我们的人拿着国旗支持奥运一样。
　　　　但不幸的是今天的活动掺杂了太多的暴力。
　　　　我在艾菲尔铁塔出来后的那段塞纳河边，火炬手是个一条腿被截肢的年轻的姑娘，另还有一男和一女保护，几乎隔5秒就冲出一个人试图去抢火炬，前进的道路异常艰难，于是为了保护这位姑娘，那一男和一女就将轮椅暂且推到了路边停放的两辆汽车中间的辖道缝隙避一避，正在我的面前。此时从路边突然冲出一个暴徒去抢火炬，而保护她的一男一女因汽车挡着无法近身，勇敢的姑娘低下头让出自己的背保护火炬，暴徒就拉扯她的胳膊还打她，那一刻我脑子里啥都没有，本能的冲上去拉拽那个暴徒，用手里的相机打他。随后我左边又有一个人冲过来打那个暴徒（还好不是打我的），还有一个法国警察过来最终把暴徒揪走了。这一切都只发生在瞬间！火炬手姑娘重新抬起头，大眼睛中含着泪水，我左边的一个中国女生向她高喊：加油，要坚强！我才缓过神来，也喊到：加油，加油！此时我的眼泪才唰的一下下来，我很悲愤，一个手无寸铁的女生，更何况是个残疾人，也要打？起码的人道主义都没有。政治运动中，永远有一些暴徒打着民主与自由的旗帜进行暴力行动。
　　　　PS:我的相机被打坏了
]]> 2008-4-9 1:40:00(0) dendrites 2008-2-9星期六(Saturday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=12646882&idWriter=0&Key=0 5. 后记
故事说完了，回味一把，兼回答ongoing的问题“你上面说植入晶状体视力恢复正常，怎么RGC的轴突还是没走对？没走对怎么可以有视觉？”
这个问题提的很好，问到了本篇故事的核心，也是最有意思的地方。
当时cori bargmann问那个问题的时候，我就眼前一亮。当时看到的表形是突变鱼丧失了视觉，视网膜神经节细胞轴突错位，但被突变的分子并不在神经系统中，在视顶盖的表面，和眼睛的晶状体里。在这个时候，如何用最简单的实验来说明最重要的问题，问题是，为什么鱼看不见了，是不是仅仅因为丧失了晶状体的缘故？
如果不是，那说明视网膜神经节细胞的轴突错位还是对视觉有些贡献，如果是，就说明视网膜神经节细胞的轴突错位不影响鱼的视力，至少对于他们检测的任务来说。
（说到这，我特意去查了查作者2005年在Development上发表的文章，里面讲解了他们怎么设计这个遗传突变筛选的，里面用到的视觉功能指标果然是非常简单的能否区分亮暗。）

好了，所以将好的晶状体移植到突变鱼中，就能立马解决这个疑问。这不是多难的问题，谁都想的到，但当时bargmann能如此之快的想到，证明了伊的超牛本色。
结果呢突变鱼接受了正常晶状体后，能够感受亮暗了，所以，当初的视觉缺损表形完全是晶状体引起，而且视网膜神经节细胞的轴突错位不影响鱼感知亮暗。
RGC的轴突当然还是错的，因为在被移植正常晶状体的突变鱼中轴突发育已经完成，再说，正常的晶状体看上去不可能指导视网膜神经节细胞的轴突定位。

这个故事告诉我们forward genetics虽然可以是强大的武器，可无法控制，不一定打中你想打的目标，这个故事还告诉我们，生物体是复杂的，control要多做几遍，看到你想要的表形不一定是你想象的机制。
这个故事呢，最后告诉我们，科学的道路是艰辛的，实验设计了也不一定设计的出来，做的出来也不一定拿得到想要到表形，拿到想要到表形也不一定是你想要到分子，拿到你想要到分子也不一定是你想象的机制。
well, 如果是个人就能做，不显得俺们scientists没什么牛叉的了嘛？

]]> 2008-2-9 6:12:00(0) dendrites 2008-2-8星期五(Friday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=12641085&idWriter=0&Key=0 
4. 收网

得，白高兴了半天，这拉网分子根本就不在神经系统中，那么这视网膜神经节细胞的轴突究竟是怎么错位的呢？
好不容易筛到的东东，也不能说扔就扔阿，做science最痛苦的就在这里，一个看上去非常简单的东西，其实机理可能非常复杂，本着面对困难绝不后退的硬骨头6连精神，也是为了为了把这个故事说圆，本篇文章作者又辛苦的做了一年。

作者在文章Figure.5中确认，神经细胞里把这个拉网分子突变，定位确实不受影响，这叫RGC non-autonomous。这个概念非常重要，因为当我们做某一个基因突变时，看到表形，要问的第一个问题就是，究竟是不是cell autonomous的。比如说，如果发现的是一个视网膜神经节细胞中的分子突变导致了定位失败，那么就是cell autonomous的，怎么确证呢？你仅仅讲视网膜神经节细胞中的分子突变，而不动其他组织细胞中的基因，看到了表形，就是视网膜神经节细胞的异常引起的。因为在基因突变鱼中，这个基因整个就被破坏了，所以什么组织里都没有这个基因，你无法知道，是因为神经系统里面缺失了这个基因导致的异常呢？还是其他系统里基因突变导致的异常。
而这个研究给了我们一个perfect的例子，其他系统的异常也可能会导致神经系统异常，所以需要仔细区分 cell-autonomous or cell-nonautonomous.
既然不是cell autonomous的，那么就是因为大脑外面的结缔组织发生了异常，从而导致了神经细胞轴突定位失败，那么究竟是怎么回事呢？

在文章Figure. 6中，曙光终于出现了，既然不是神经系统的问题，那么会不会是神经系统邻居的问题呢？我们知道在大脑里，神经细胞是被ECM，胞外基质包围着的，所以胞外基质出了问题，神经元八成快活不到那里去。比如一座大楼，神经元是里面的住户，而胞外基质是里面的水管电路和中央空调，断水断电加上中央空调坏掉，里面的住户就要发彪了。

本文作者发现，一个非常有趣的胞外基质组分HSPG，一种多糖，（具体名称懒的查了，见谅）在突变鱼的大脑中分布发生了变化，比如在Figure.6中，本来这种多糖很整齐的分布在神经细胞组成的神经网上，但是在突变鱼的大脑中被严重破坏了。怎么破坏的呢？这种多糖在视顶盖的表层非常富集，在突变鱼中表现的非常难看，看来视视顶盖外面的胶原网络对这种多糖的分布有关。

这种多糖干什么的呢？最近几年的研究刚刚证明这种多糖与神经细胞轴突的导向非常有关系，相信发现了这个以后，作者长舒了一口气，总算回到神经系统中来了。
接下来，他们用胶原酶水解了胶原，用多糖酶水解了HSPG，基本copy了拉网突变的表形。所以最后说明，神经系统外层的胶原分子网络对胞外基质HSPG的正确分布有关系，而对神经元轴突导向直接有作用的，可能是胞外基质中的HSPG。作者本来希望寻找轴突导向的蛋白质，用基因突变的方法，没想到最后发现可能会有作用的，却是多糖。

比如说一座大楼，本来我们以为每家住户能成功找到家，是因为有个领路人，于是对大楼群扔了一些炸弹，进行了一番破坏，进行loss of function研究，发现一座大楼里面的住户找不到家了，仔细一看，这些住户胳膊腿完整，脑袋没坏。大楼顶层塌方了，而大楼顶层一塌方不要紧，把水管电路中央空调砸坏了。而原来可能负责指路的是楼梯里面的指示灯，这一没电，住户当然不知道该往那里走了？

]]> 2008-2-8 6:33:00(0) dendrites 2008-2-7星期四(Thursday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=12634710&idWriter=0&Key=0 3. 撒网
筛选开始了，一个看不见东西的鱼引起了他们的注意。拿出来一看，嘿，这神经元送到顶盖的轴突还真受影响了！见原文章 Figure.1，2，3。而且还是特别有意思的影响，表现位轴突迷路了，本来该老老实实进指定层的轴突胡乱就位。perfect phenotype!
接下来他们就找究竟是什么基因被破坏了，基因找到，命名为 dragnet，拉网，很形象阿，神经元伸出的轴突就像渔网一样的，这个基因看来是管撒网拉网的。但是这个基因被找到后，居然是一个胶原蛋白？！
Baier在2006 GRC给talk的时候说，如果是IgG superfamily, great, 其他的细胞粘连分子，good, but 胶原蛋白？@#@#$#$%^$%^%^&%^&！
因为什么呢？现在被发现的一些具备导向功能的分子大多有一些特征，比如说IgG domain阿什么的，这胶原蛋白，从来没听说有这种导向功能。先不管，如果真可以干这个，不也是一个大突破嘛？

接下来他们看看这个基因究竟在那里表达吧，怪事出现了，这个拉网分子居然不在神经系统里面表达，而是在视顶盖表面表达，胶原嘛，老老实实在结缔组织里面表达！
faint，那这个鱼怎么会瞎了眼的？？？
不好意思，鱼眼里面的晶状体碰巧是胶原蛋白组成的，而这个拉网分子就是在晶状体里面高度表达的，见Figure.4.这个基因被突变，晶状体没了，鱼当然看不见东西了！#$%^&#$%^&$%^&!!

当时Baier讲到这里的时候，听众全faint，而智商高达200的cori bargman发问了，那你把好的晶状体移植会这个突变鱼，会怎么样？baier看来智商也很高，说我们做过了，鱼视力回复正常！#$%^&@#$%^&$%!!!
结论so far，拉网分子突变鱼只所以看不见，不是因为轴突导向到视顶盖失败，而是由于丧失了正常的晶状体！

]]> 2008-2-7 2:52:00(0) dendrites 2008-2-6星期三(Wednesday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=12628812&idWriter=0&Key=0 2. 传说

话说这篇文章的起源是企图研究这个问题，神经细胞轴突的分层分布究竟是如何形成的。
这个问题现在比较热。首先，我们知道神经系统许多部分都是分层分布的，比如大脑皮层，分5-6层，每层的细胞分布都有不同，功能也不同，大脑皮层的大门是第4层。那么比如说大脑皮层的神经细胞输入，大多是丘脑传过来的，丘脑的神经元轴突，究竟是怎么知道把轴突送到大脑皮层第4层去呢？万一送错了不就麻烦了嘛？
这个问题现在为什么热呢？说到底这是一个神经细胞轴突导向在体内是如何调控的问题。神经细胞轴突导向已经热了有些年，marc tessier-levigne and et al.把神经细胞在脊髓发育中的过程研究的非常透彻，克隆了一系列终于的分子，比如说netrin, 已经goodman克隆的 semaphorin.这些分子都被证明对神经细胞轴突导向的过程中非常重要。
但是以前所有的实验要么是果蝇，要么是脊髓系统，还没有人能非常清楚的研究，在最重要的体内系统－－大脑中，神经元的轴突导向是如何调控的。比如我说的这个大脑皮层的输入究竟是如何维持如此专一的特异性的。（当然，饶毅做过很漂亮的实验，slit分子对嗅球中的轴突导向有作用，等等。）
而既然我们都已经知道了这么多管导向的分子，小鼠knock out又都有了，研究这些问题难道不是不难的事情嘛？嗯，所以很热，大家都知道怎么做，看谁做的快了。最近josh sanes刚和另外一个组side by side的发了一篇文章说果蝇中的神奇分子dscam对视网膜中分层发育有作用。

回到这篇文章上来，Baier是做斑马鱼的，这篇文章是利用斑马鱼系统做forward genetics研究，用遗传筛选的方法来找什么分子对斑马鱼中，神经元轴突的分层分布有贡献。
他们看的系统是斑马鱼眼睛里的神经细胞送出的神经轴突，发送到视顶盖,tectum，这个过程也是非常清楚的分层行为，视顶盖相当与高等动物的视觉皮层，也是分几层的，他们呢，用细胞膜定位的GFP来标记视网膜神经节细胞送出的轴突，对斑马鱼进行诱导突变，然后观察有那些斑马鱼的轴突分层分布受到了损坏，如果有受损坏，那么回去找什么基因被破坏，从而得到什么基因对视网膜神经节细胞轴突分层分布的过程重要。
遗传筛选是体力活，看轴突分布太慢，都得看显微镜，于是他们用了一个快的指标来筛选轴突定位受破坏的突变鱼。
你想，如果轴突分布受到破坏，那么视网膜的信息必定不能顺利，完整的传到视顶盖，那么鱼的视觉肯定受影响？！于是他们对鱼诱导突变后，把视觉受损坏的鱼拿出来，然后再看这些鱼的轴突分布是否被破坏。很聪明阿？恶梦就这样开始了....

]]> 2008-2-6 3:11:00(0) dendrites 2008-2-6星期三(Wednesday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=12628810&idWriter=0&Key=0 1. 背景阅读

Nature Neuroscience 10, 1529 - 1537 (2007)
Published online: 4 November 2007 | doi:10.1038/nn2002

Lamina-specific axonal projections in the zebrafish tectum require the type
IV collagen Dragnet
Tong Xiao & Herwig Baier

这篇要写的是主要是这篇文章，寻找分层导向分子的故事。
这篇文章的主角叫 dragnet, 拉网，于是称为拉网小调。
第一次听到这个故事是2006年8月份的GRC，Baier第一次讲这个研究，当时听的非常有意思，但是文章还没发表出来，所以不好
多说。现在文章终于出来了。于是可以讲一讲我所知的文章背后的故事。]]> 2008-2-6 3:10:00(0) dendrites 2007-5-27星期日(Sunday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9755167&idWriter=0&Key=0 Figure 4. 尾声。
接下来，我不说大家也应该知道他们做了什么了。
他们对p25过表达AD模型老鼠的大脑中注射HDAC抑制剂，获得了和丰富环境非常类似的疗效。条件反射学习增强，空间学习增强。而且对已经学习而获得的记忆回忆能力也增强。
数据基本就是把figure1,2再重复了一遍。

还有点值得讨论的是，HDAC抑制剂对回忆机制的影响。

Tonegawa2002年一篇science article在海马CA3中敲除NMDA受体，结果发现小鼠的回忆受影响了，那个结果很make sense，因为海马中的神经网络对于对以往记忆的抽取应该是有贡献的。

那么HDAC抑制剂的结果说明了什么？很有意思，说明了对以往记忆的抽取可能也是依赖于转录的，至少增强转录也能促进回忆。这个东西以前别人没有那么详细做过。
因为大家都觉得，新学习的时候，看阿，学阿，神经活性诱导基因表达，然后我们就学会了。
而回忆是否与转录机制有关非常不清楚，也不是很make sense，因为回忆无非是把一些储存在某个皮层的记忆抽回来，可能需要神经网络的活性，可能需要NMDA受体。
这篇文章的数据表明，居然还可能依赖转录机制，就是说，神经网络的活性可能都会经历转录机制？还是都需要转录机制，启动新蛋白的合成来对学习新的东西，或回忆旧的东西引发的神经活性进行巩固？
这是我觉得这篇文章另外一个非常有意思的地方。

总结，这篇文章先用丰富环境的刺激发现可以恢复p25 AD疾病模型小鼠的高级认知功能，学习和记忆。然后他们发现在经历丰富环境的时候，小鼠大脑中的海马区和大脑皮层中的某些组蛋白乙酰化水平上升。然后他们用组蛋白去乙酰化酶抑制剂发现可以促进正常小鼠以及p25疾病模型小鼠的认知功能。这篇文章提示组蛋白去乙酰化酶抑制剂可能具备治疗AD的疗效。而且，给出了证据，组蛋白的乙酰化水平与学习记忆功能有相关性。
]]> 2008-2-22 16:49:00(1) dendrites 2007-5-27星期日(Sunday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9755164&idWriter=0&Key=0 Figure3, 正题。
从Figure 2，我们知道，作者给予p25过表达模型丰富环境的刺激，成功的提高了AD模型模型小鼠的高级认知能力。不仅仅表现为增强学习能力，还表现为对已经形成的记忆大大增强了回忆的能力。实在很有意思。那么分子机制究竟如何呢？
我们可以想象，在老鼠在游乐场happy的时候，大脑中必定经过的非常复杂的变化，很多基因被打开或关上，而对已经被损伤的神经网络产生了修复的作用。这篇文章的作者选择了一个方向继续讨论，就是我前面背景说的epigenetics调控方面。

她们发现在野生型老鼠在游乐场玩乐的时候，海马区和大脑皮层中的组蛋白乙酰化水平有部分上调。
这个结果前面有人argue，并不具备说服力，说的非常对。

第一，needlescrub指出，她们并不能说明甚至是神经元中发生的变化，exactly!那么怎样说明确实是神经元中发生的变化呢？可以用她们做突触蛋白IHC的方法，直接看神经元中的免疫组化鉴定出的信号强度。问题是，可惜，我从来不相信IHC给出的蛋白水平上调或下调有说服力，因为很简单，做免疫组化，你要给老鼠做perfusion, 在解剖，这就已经至少15-30分钟了，在这过程，很多基因表达就变化过了。有一些文章号称，做快速的解剖，可以几分钟搞定，但是，还是IHC的过程也是非常难控制，哪步染色一出问题，结果都很难定量。
这么看来，好像还是直接整WB直接些，半斤八两了。

第二，HENBEN指出，她们发现的组蛋白水平变化太大，似乎有许多基因被调控。也非常对。
1.她们并不知道多少基因在丰富环境的刺激过程中被调控，我们unpublished的data，电信号也许确实能激活远超过20%的基因上调。这个结果我跟puppeteer稍微讨论了一点，（河马给我保密阿，不过至少2年前了，可能他已经忘了，呵呵）。还非常preliminary， 现在我会把那个结果放在一边，以后自己有机会做。所以大规模的基因变化并非不可能。
2. 她们只看整体的组蛋白水平变化，确实不准确，如果是我，我会在组织中做Chromatin IP，看那些已知被神经电信号调控的基因的启动子上是否发生了增强乙酰化的变化。但是呢，那些被神经电信号调控的基因本身是否是高等认知功能有关，其实也不清楚。所以看整体的乙酰化水平，也不是很糟糕的主意。如果这个结果可信的话，将说明，丰富环境的强烈刺激，可以很显著的上调某几个组蛋白的乙酰化水平。

Figure 3ab.看来海马中变化强一些，有可能，因为那个时候是获取新信息的时候，海马是行使主要学习功能的。

Figure 3cdef,她们最striking的实验出来了。既然丰富环境可以引发组蛋白乙酰化上调，那么人为加药抑制组蛋白的乙酰化水平，是否对野生的小鼠的学习和记忆产生影响？这确实是artefact，不过是可能挽救上千万AD病人的artefact.而且不仅仅对于AD病人，对整个人类社会都可能会产生影响。
增强记忆的希望又出现了吗？为什么要说又？？
她们对野生型老鼠进行实验，发现，注射HDAC的抑制剂，可以促进小鼠的学习和记忆功能。
这个结果如果是真的的话，将会宣告一个新时代的来临。
让我们回顾一把历史，看看目前有什么东西能促进学习和记忆，genetically.
1.tim tully, CA CREB在果蝇中促进学习和记忆，然后他们就成立公司做药去了，用增强cAMP信号途径去筛药，遗憾的是，前几年，刚刚有几篇文章在journal of neuroscience上，居然发现他们当初那个CA CREB的construct有移码突变！结果根本没有任何CA CREB被表达出来。然后做了不移码突变的CA CREB，重复了实验，发现，NO EFFECT! what?
2.Joe Tsien NR2b overexpression 在小鼠中促进学习和记忆，是谓聪明老鼠。但是那个结果并不被广泛承认，后来钱卓自己也不做那个了。
3.barco&Kandel用增强版CREB, VP16-CREB在老鼠里转基因，显然是希望把老鼠变聪明，结果显然是没结果，然后他们用那个老鼠发了一篇文章，说鉴定到一堆可以被VP16-CREB调控的基因。

其他的一些结果往往是很微弱的作用，而且没有被准确的鉴定。

这个Figure 3cdef的结果如果属实，将提供另外一个可以在正常动物中迅速提高高等认知功能的希望。

这个希望如此诱人，以至于人们对完整的逻辑并不那么在于了，HDAC被抑制是否是正常的学习和记忆所必须的呢？前面我背景里说的 Mayford的CBP文章指出CBP的HAT组蛋白乙酰化酶活性缺失是会学习记忆有损伤作用的。所以，很有可能HDAC被一定程度的抑制是学习记忆过程中会发生的。但是现在，没有公认的HDAC agonist, CA-HDAC，要直接这么这一点，还真有点麻烦。

]]> 2007-5-27 6:05:00(0) dendrites 2007-5-27星期日(Sunday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9755163&idWriter=0&Key=0 Figure 3.
part 1, 背景上

有了有趣的现象，我们需要知道分子机理，现在是分子生物学的时代。
在这个figure里，她们讨论的一个有趣概念，epigenetically modification，简单的说，以前我们认为基因决定一切，生物体的所有信息都是基因组决定的，后来呢，一些有趣的现象被发现，比如，基因组序列完全一样的生物体，表现出了完全不同的表形。那么就是说基因组的序列不完全决定生物体的一切。后来发现DNA序列一样，但是表形不一样，常常是因为DNA，和包裹DNA的组蛋白被修饰了，比如甲基化，乙酰化等等。现在这些修饰已经开始被认识，这个领域开始发热，刚刚的Cell上4个组报道同一个东西，某某是组蛋白修饰的酶。这个现象表现出了所有火暴领域的共性，你追我赶，看谁更快。
回到这篇文章上来，这些与DNA序列无关的修饰，甲基化，乙酰化和学习记忆有什么关系呢？
我的“从mRNA说起”中谈到了，N十年前，L Squire证明，新基因的表达是学习和记忆必须的。这些epigenetically修饰是与基因开关紧密相连的。我举个最简单的例子。比如说基因A的表达是学习记忆必须的，好，当我们学习的时候，相关的神经活性就会启动这个基因的表达，然后我们就学到新东西了，记住了。这些被诱导的基因都不是看家基因，都是会开会关的。现在知道它们被激活一定时间后就会被关上。下次我们再学习的时候，又会被打开。假如，这个基因打开的过程中，涉及到了它的启动子上的组蛋白发生了乙酰化，那么，如果我能够操纵这个修饰，能够让它打开的更快？我是不是能学习的更快？让它打开的时间更久，是不是能记住的更久？
那么究竟这些epigenetically 修饰是否能够影响高级的认知功能，就成了一个非常有意思的问题。

Figure 3,背景下
第一个把epigenetical modification 和高级认知功能扯上关系的，是一个分子，叫
CBP,CREB binding protein.这个蛋白的发现很有意思，当CREB被发现之后，人们都非
常惊奇，一个分子能对第二信使cAMP作出迅速反应而被磷酸化。于是他们就开始寻找
CREB的结合蛋白，RH Goodman的实验室做了一个非常漂亮的工作，他们用被磷酸化的
CREB做探针，克隆了一个蛋白，特异性的与磷酸化的CREB相结合，于是命名为CREB结合
蛋白。随后，又有令人惊奇的发现，CBP居然具备HAT的活性，组蛋白乙酰化酶活性。随
后几个组报道CBP能对第二信使钙离子作出反应，被磷酸化，而且钙刺激可以升高CBP的
增强转录功能。需要指出的是CBP蛋白本身非常大，非常大，非常大。操作大蛋白真是
一场恶梦，其实CBP的功能，现在还不是很清楚。

那么既然CBP可以被钙离子调控，有具备乙酰化组蛋白的活性，我们知道高级认知功能
相关的神经活动中，钙离子介导的过程占有核心的地位。那么是否是钙离子会通过调控
CBP的活性来修饰组蛋白，进而修饰染色体的活性，而对基因转录继续epigenetically
的调控呢？
一直到2004年，才有两个组并排报道了CBP loss of function的研究，Barco & Kandel
, Mayford。
一个组是用CBP杂合体来进行高等认知功能的研究，因为纯合缺失老鼠会死。另外一个
组是用转基因转进去一个没有HAT酶活性的CBP，他们都发现了老鼠的高等认知功能被损
坏了。那么就是说CBP可能确实是对高等认知功能有贡献喽？那两篇文章之所以仅仅是
Neuron而不是Cell的原因是，他们无法找到在这些变笨的老鼠，CBP功能损坏的老鼠的
大脑内，组蛋白的乙酰化有任何明显的变化，唯一的变化是Barco&Kandel文章里show的
一个H2A还是H2B乙酰化降低了，完全没有道理。
需要指出的是，虽然CBP具备HAT活性，但后来人们发现，这HAT活性不仅仅陷于对组蛋
白进行乙酰化，对其他蛋白也能乙酰化。所以CBP的功能缺失而对高等认知功能的影响
看来机理完全不是人们预想的那样，具体什么样，现在还不清楚。
罗嗦完了背景，下面我们可以进入正题了。

]]> 2007-5-27 6:04:00(0) dendrites 2007-5-27星期日(Sunday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9755162&idWriter=0&Key=0 Figure 1.
言归正传，这篇文章的第一个figure, a, 先增强p25表达6个星期，老鼠痴呆了，然后给于增强或不增强环境的刺激，b, 增强环境刺激并不能使大脑的整体重量发生变化，因为，这时的老鼠已经完全成年，就算有干细胞生成，整体的结构发生变化的可能性并不大，神经元都使不会再分裂的了。哦，说到这，你说她们如果看看这个时候海马的neurogenesis是否有变化是不是会非常有意思呢?她们没有看，或看了，没提，因为跟本文的主题无关。
c,d, 哇，好玩了，已经痴呆的老鼠经过环境刺激，到游乐场happy了一圈，明显变聪明了，水迷宫测试增强反应，对恐惧的条件反射也明显增强。e，这时海马中的突触相关蛋白也表达上升，suggest突触的功能上升，加上f， 她们看了PSD95, GAP43,synaptophysin， 都显著上升。
注意，问题出来了，突触功能真的增强了嘛？？？最有说服力的证据无疑是电生理证据，而不仅仅是生化的证据。她们在2005的文章里有非常漂亮的电生理，但是在这篇文章里，却没有这个最最最重要的数据。


Figure 2.
在第一个figure里，她们发现了吃喝玩乐可以增强痴呆老鼠的学习和记忆能力，哈哈，有意思。但是问题出来了，她们本来做的是AD老年痴呆症模型，在人类的老年痴呆症中，除了早老性老年痴呆，其他的发病都很晚，那么对于人类来说，关心的就不是能否学习新的东西，谁快退休了还关心能不能考试及格？对于人类的老年痴呆病人来说，严重影响生活质量的是丧失了原来的记忆，比如说甚至忘记了自己的亲人的面孔。这非常糟糕，在对AD研究中，已经注意到了突触功能的丧失可能与这个过程有关，著名的Roberto Malinow同志就决心投身于为AD病人造福的研究中去了，让纯理论的synaptic plasticity靠边站吧。btw, AD领域很多钞票地。
言归正传，那么她们的p25过表达模型是否能够真实反应人类老年痴呆病人的不能维持记忆的症状呢，如果有的话，游乐场的玩乐能否挽救这个症状呢？
2ab, 她们让老鼠先学习，然后休息4周，这是别人摸索出来的需要巩固记忆的时间，据认为，这么久呢，记忆这个东西，如果确实是个东西的话，就被从刚刚获得的海马区，储存到了神秘的大脑皮层某处。她们等老鼠学习到的记忆巩固之后，诱导p25的6周表达，发现，然后确实，老鼠不能记住已经学会的任务了。
2cd, happy time!在p25过表达之后，把老鼠扔进游乐场，之后测试，奇迹出现了，老鼠居然又能完成当初学习的任务了。这个结果非常有意思。因为在老鼠进游乐场之前，根据 figure 2a, 老鼠已经不能够记住当初学习的任务了，就是说大脑的功能已经收到了破坏，这个时候，在进行丰富环境的刺激，说明某种修复发生了，而且使大脑被损坏的老鼠又能回忆起，哦，我原来学过这门课的。
2ef,那么究竟是什么修复呢？她们再一次用突触蛋白的水平来说明，不够不够不够！我特别奇怪，她们picower做电生理的成堆，怎么可能找不到合作的？
]]> 2007-5-27 6:03:00(0) dendrites 2007-5-27星期日(Sunday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9755160&idWriter=0&Key=0 Journal Club
Recovery of learning and memory is associated with chromatin remodelling.
Nature. 2007 May 10;447(7141):178-82.

前期工作： Opposing roles of transient and prolonged expression of p25 in synaptic plasticity and hippocampus-dependent memory.
Neuron. 2005 Dec 8;48(5):825-38.
Aberrant Cdk5 activation by p25 triggers pathological events leading to neurodegeneration and neurofibrillary tangles.
Neuron. 2003 Oct 30;40(3):471-83.

前言

这是一篇非常有意思的文章。来自Li-Huei Tsai实验室。
几年前，她实验室做了一个小鼠老年痴呆症AD模型，在神经系统中特异性的表达一个激酶CDK5的底物p25，发现，如果持续增强表达6个星期，小鼠就会表现出AD的表形，而且大脑中会出现淀粉斑样的一堆东西。
这篇文章里，她们尝试着对这种疾病表形进行挽救，取得了非常有意思的结果。
N年前，人们发现，用加强环境刺激的情况下，对小鼠的学习记忆能力有促进左右，比如说把老鼠扔到一个环境特别复杂的环境，有好多好玩的玩具等等，（这篇文章的第一个附图就是）老鼠开心阿，玩阿，然后就变聪明了，表现为学习记忆能力增强，水迷宫阿什么的，（对水迷宫不了解的请看“神经干细胞与学习和记忆”）。必须提到的是，加强环境刺激也会增强海马中神经干细胞的生成，引发了无数的争论，哦，那么神经干细胞究竟是不是成年动物学习和记忆有关的呢？

]]> 2007-5-27 6:03:00(0) dendrites 2007-4-2星期一(Monday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9099583&idWriter=0&Key=0 

http://www.myheritage.com

]]> 2007-4-2 5:40:00(0) dendrites 2007-4-2星期一(Monday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=9099570&idWriter=0&Key=0 http://www.myheritage.com]]> 2007-4-2 5:19:00(0) dendrites 2007-3-25星期日(Sunday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=8999550&idWriter=0&Key=0 权利是争来的，
在号称牛叉，发达，文明，富庶的不得了的世界超级第一强国－－美国也是如此，最近老坐公共汽车，看到车中有一个标语，it all started on a bus，说一个黑人妇女拒绝让座，开始1955年的黑人权利运动，google了一把，找到了事情的因由。
http://news.sina.com.cn/w/2004-04-16/18013136057.shtml
打响民权运动第一枪的是美国阿拉巴马州的一位黑人妇女。当时该州的法律规定，公共汽车上黑人、白人必须隔离，各就其位，但满座后黑人要给白人让座。1955年12月1日，一位名叫露萨·派克斯的黑人中年妇女在车上拒绝为白人让座，结果被投入监狱。虽然当天她就由自己当老板的丈夫、一位白人律师保释出狱(有正义感的白人也加入了黑人的斗争行列)，但黑人要求废止种族隔离的斗争就此燎原之势，燃遍全美。黑人不分男女老少，抵制坐公共汽车，下雨也坚持步行。最后，美国最高法院认定种族隔离违反宪法。

想想美国1955年是世界第一强国，可以用爆有钱，爆有文化，爆先进发达来形容，居然还把黑人不当人看？真是非常搞笑。
丫的还真好意思恬着脸教育别人？
中国现在的社会相对发达程度，跟1955年的美国差多了吧，等50年后我们牛叉了，我们也在钉子户的地方盖个纪念碑，上书，现代中国的起点！]]> 2007-3-25 14:37:00(0) dendrites 2007-3-17星期六(Saturday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=8894065&idWriter=0&Key=0 Greenberg’s Lab Tips 实验生物学圣经

(1)If the protocol works, don't change it (If it ain’t broke, don’t fix it).

(2)If the protocol doesn’t work, change it.

(3)If a protocol requires a laborious step, there is usually a reason for it – don’t try to avoid it (You are not as smart as you think).

(4)Two hours of work today will save you two days of work tomorrow.

(5)Every new experiment needs a positive control and a negative control (Corollary of(4),above).

(6)There are three types of experiments: One which yields interesting results, no matter the outcome (Type I), one which yields an interesting result, but only if it turns out one way (Type II), and one which yields ambiguous, uninterpretable results regardless of the outcome (Type III).Take your pick.

(7)Label every tube and record every experiment.

(8)Assume nothing. A corollary of this is that opinions don’t matter, only data does.

(9)Experiments often don’t work. Consider all the possible reason why an experiment fails and concentrate on the likeliest causes.

(10)Complicated, multi-step experiments never succeed unless they are simplified. Break up each experiment into its components, work on one at a time, and verify that each component works before proceeding on to the next(Take one step at a time).

(11)Don’t try to recreate the wheel. If someone else has successfully performed the same experiment as you plan to do, talk to her.

(12)Plan every experiment as if it will become a figure in a manuscript.

(13)If someone asks for your help, be as helpful as you can(What comes around, goes around).

(14)It is more important to be accurate than prolific. It’s also helpful to be prolific.

(15)If an experiment is not hypothesis-driven, then it can prove nothing.

(16)What matters in science is not what can possibly occur, but what actually does occur.

(17)Read widely. The most creative insights come from applying knowledge from outside one’s field.]]> 2007-3-17 8:07:00(0) dendrites 2007-3-5星期一(Monday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=8741657&idWriter=0&Key=0 漫谈大牛系列之，Susumu Tonegawa
　　　　
　　　　说此此人，偶可是心潮澎湃啊。一看名字就知道这是个鬼子了，大家可能都不怎么知道，如果不是作免疫的或者做神经的话。但是如果我告诉你他的日本名字，利川根进，你大概就知道了，如果还不知道就得去古沟一把了。此人1987 年因为阐明抗体多样性的遗传原理获诺贝尔奖，因为实在是他一个人的功劳，于是他一个人独拿了一个米林美刀啊。
　　　　
　　　　我可不是要说他的免疫学贡献，而是说他的神经生物学贡献，牛人就是牛人啊，此人是我心目中真正的不世出的大师。从他在日本上大学开始说起，大学上完了干什么去呢？日本教授语重心长的说，要学习科学，还是得出国啊！于是小利开始了漫长的GT申请路，他到了我现在在的这个学校UCSD读生物学的博士，当时UCSD才刚刚建校， UCSD1960年建校，现在自吹the youngest of the best，但当小利读生物学博士生的时候，估计还是没那么牛叉的。他读的什么我也忘了，反正诺奖网站的自传里都有，你们可以自己去看。总之PHD拿到了，接下来干什么呢？当然是做博后了，但是当时年轻的利博士被美国移民局恶心了一把，说他的签证到期了，不能在美国待了，一定要卷铺盖走人！年轻的生物学博士在当时虽然不象现在满街都是，但也还是算不上是什么美国一定要留下来的优秀人才。于是小利博士只好去欧洲混了，动机不清楚，反正当时要么就美国，要么就欧洲，日本的科学还很烂呢。这段小利博士在欧洲的工作，也就是拿诺贝尔奖的工作，他自己写了个纪念文章，the great time in Basel，放在cell生物学贡献30年的专辑里，大家有兴趣可以去看。
　　　　
　　　　总算写到他为什么会成为我的偶像了。这个时候是90年代初，利川根进功成名就，被势利的美国人又请了回来，在MIT的癌症中心，又是HHMI，诺奖刚拿过，风头一时无二，cell也是一篇接一篇的发，但是到这个时候，大师就和普通人不一样了，普通人发了一百万的横财，多半会没事数数钞票，花花绿绿，开心啊！大师总会把目光放到普通人看不到的地方，开辟新的战场，因为他们清楚的知道，现在发cell的东西5年后大多只能发JBC，而且利川根进自己也认为免疫学最重要的问题已经被他解决了，其他的都是一些小问题了。
　　　　
　　　　说到这里多说几句，超级大牛们经常会努力寻找真正的大问题，大到可以拿诺贝尔的问题，利川根进就是这个意思，免疫学里如果再想拿诺贝尔，是非常难了，因为其他的问题离拿诺贝尔都差的很远了。插一句，比如UCSD的C Zuker，就是一个这种人，本来做果蝇的视觉，做的极牛，也发了无数篇cell, 也进了HHMI，但是你往远处看，这个领域已经给过诺贝尔了，而且再做下去都是细节问题，而且那个领域大牛已经很多，要再发奖也很难发到你这个后辈手上，所以Zuker风头一转，居然从90年代中期开始转向去做味觉受体了，一把克隆了N多味觉受体，这下好了，要么味觉受体不给诺贝尔，要给就肯定有他的份。我们可以想象，只要Zuker够长寿，诺贝尔奖金肯定发的到他手上，因为嗅觉受体克隆的奖前几年刚发过。
　　　　
　　　　回到利川根进的故事上来，90年代初，这个时候，转基因技术正处在热火朝天的时期，而基因KO技术也刚刚诞生，因为利川根进本来就是做分子生物学出身的，所以这些分子遗传学技术非常熟练，关键在于解决什么问题。这个时候，一个人走进了他的实验室，此人叫Alcino Silva，最初缘由我并不清楚，结果是Silva用利川根进实验室的技术，鉴定了一个小鼠突变品系具有学习和记忆的缺陷，这个突变就是 alphaCaMKII的突变，这个钙调激酶独领风骚一直到现在，因为这个激酶只在大脑皮层和海马中丰富表达，而且对高级的神经功能确实重要。Silva 和tonegawa首先将分子遗传学的方法应用到神经生物学，或者说到学习记忆的研究中来。他们与1992年发了两片science，开辟了一个时代。 Silva因为卓越的贡献到冷泉港去做老板，接着整，与1994年在小鼠系统中做出CREB对学习记忆重要，发在cell上，当时那期cell还有冷泉港 tim tully的另外两篇在果蝇中做creb关于学习记忆的文章。Silva走后，tonegawa继续深入完善分子遗传学的方法，于1996年实现突破，在小鼠中实现用大脑区域特异性性基因KO的方法，而且接着整出几个大结果，那期cell上一下子tonegawa整了3－4篇，其中两片是钱卓做的，就是后来做出聪明鼠的那个。因为进展实在太大了，神经科学大牛C Stevens激动的做preview，说梦想成真了 dreams come true！在经历了数十年的努力，对学习和记忆的认识，从1992年到1996年，一下子从细胞水平前进到了分子水平。写到这，感慨一把，套用"明朝那些事儿"的话，江山如画，一时多少豪杰！！！
　　　　
　　　　Tonegawa找到这个宝藏后，马上开始用最新的KO方法在小鼠系统中做学习和记忆，效果不错，鉴定出了一系列激酶，酯酶，神经递质受体，七七八八都对学习记忆很重要。然后他索性在MIT创立了picower center of learning and memory，招了几个牛人去，比如我上文说到的Mike Greenberg的第一个研究生Morgan Sheng, 当时是把sheng从哈佛挖到MIT去的。Tonegawa在这个领域的主要贡献在于用最牛叉的分子遗传学的方法对小鼠的学习记忆进行了详细的分析，简单的说就是区域特异性的基因KO，以及后来发展的诱导性的KO，这些贡献完全的填补了一个空白，发的文章就只算cell的话，我的手指头和脚趾头都不够数的了。
　　　　我当初申请博后的时候，看到他们在2002年发的一篇science article说特异性的敲除大脑中海马区某一个位置的NMDA受体，居然只影响小鼠的回忆而不影响新记忆的形成！那篇文章看的我兴奋死了，决定以后就做这个了，但是tonegawa实验室显然对我来说太难进。但现在总算快要做类似的东西了，我的特异性突变小鼠马上就要大规模开始分析了，也会用学习记忆的模型来进行检测。
　　　　
　　　　利川根进2002年10月初到中国来了，北京上海逛了一圈，在神经所给了talk，同时把 picower center的几个年轻老板都拉过来了，我激动的几天没睡着觉，好好啃了几篇他们的文章，攒出俩问题，老头一来，远远望去，非常随意，领带都没打，很不象日本人的作风，但说起话来还是非常重的日本口音，所以大家说话有口音也不用自卑，有口音的大牛海了去了。Talk刚完，我手还没举起来，我辛辛苦苦准备的第一个问题就被别人问掉了，我强烈的晕倒了一把，心想我容易么我，也不是学这个的，看了几天文章才整出一个问题，一下就被神经所的学生搞定了，实在是郁闷，但后来总算还是轮到我问了，我鼓起勇气，第一次（真是第一次）向给talk的老外问出了问题，很遗憾，利川根进没听懂，可能是我没说清楚，于是我重复了几遍，他总算明白了，瞎扯了几句，不过我的问题也基本是瞎扯的。本来我还想会后找他陶瓷来着，后来实在没胆子了，作罢了。
　　　　我给他发的申请博后的信他是一封也没回，后来我知道，这种大牛一天要收到200封email，如果你不是他认识的，或者你的老板不是他认识的，或者没发过CNS的，基本是没有可能有什么戏的。
　　　　
　　　　利川根进近年想退休，回日本养老，但不知为何久久未能成行，再多的八卦我也不知道了，这个消息是开会的时候遇到一个picower center里的另外一个日本小老板，我说对tonegawa很崇拜，他瞎扯的，再多的就和science无关了。
　　　　作为结尾，开会的时候当时几个人吃饭时候聊天，这个日本小老板说tonegawa还没退休，旁边的一个哥们问，why? Does he still want the second prize? 这个日本小老板回答 " If he could live long enough."]]> 2007-3-5 2:17:00(0) dendrites 2007-3-5星期一(Monday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=8741649&idWriter=0&Key=0 从mRNA说起，修订版　　　　

其实这真是个挂样头买狗肉的题目。我是并不从mRNA说起. 我要从学习记忆的研究说起。学习记忆，多么令人着迷的话题。我决定这辈子就整这个了。　　　
1970年，学习记忆的研究机制取得重大突破。那是其实也一直到现在，最根本的问题就是，外界的信息是怎样传到大脑，并巩固下来？那个时候基因热啊，因为分子生物学正在狂飚期。所以很容易进行一个简单的假设，外界的信息传到大脑，诱导了多种基因的表达（那是monod和jacob的模型也刚刚出现），然后巩固了神经连接，或者储存某种物质？蛋白质？那时候还只知道蛋白质呢。　　　　
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好，如果这个模型成立，如果人为阻断基因的转录和蛋白质的合成，就应该能对记忆的形成和巩固产生影响！Larry Squire，现在在UCSD，分别用转录抑制剂Actinomycin-D和翻译抑制剂Cycloheximide，发现都能够对记忆产生这样那样的影响。一下子，对学习记忆机制的了解前进了一大步. 请注意，这里并没有区分究竟是转录调控重要还是翻译调控更重要。然后Larry Squire又搞清楚了海马是记忆的核心区域，当然还有其他人的功劳，总之他不得个Nobel实在是亏啊。
时光一下子到1980－90年。我们已经知道基因转录和蛋白质合成对学习记忆非常重要，那么怎么研究其中得分子细胞机制呢？Eric Kandel登场了，当然还有用果蝇研究学习记忆得一号猛人，慢慢再说。Kandel是个生理学家，好像也就是MD。
他应用了一个简单得模型，海兔，是一种在海水里生活得软体动物。这种动物有简单得条件反射。于是Kandel的贡献之一就是用这么简单得模型，他做了几十年，从60年代做到90年代，搞清楚了海兔的神经回路里面，究竟条件反射是怎么产生的，各种神经递质怎样传来传去，这使他拿到2000的Nobel。他做海兔的同时当然也主要到海兔的学习模式中的各种细胞被信号通路变化，比如说cAMP信号，cAMP可以说是和学习记忆最相关的第二信使之一了，后来发现还有钙离子。Kandel另外一个巨大贡献是对学习记忆的分子细胞生物学的贡献。这里首先说LTP，LTD，是神经细胞之间的回路，他们之间的回路可以被修饰后人为的增大和降低传输效率，比如说，对他们进行高频率的电刺激，发现过了一会他们之间的传输效率大大增强，于是叫长时程增强，LTP，如果对他们进行低频率的电刺激，他们之间的传输效率会大大减弱，LTD是也。当然后来这个模型经过了无数的修改。这个玩意也是老蒲的看家本领之一。因为LTP很容易被认为是学习记忆的神经元模型，老看书啊，结果就增强了刺激，就记住了，对不对。当然有多少人相信，就有多少人不相信，因为你怎么知道体内是不是这样的，体内从来不会发生像人为LTP那样的
高频刺激。Kandel就开始做LTP的分子机制，他把转录的抑制剂加到发生LTP的回路中去，发现早期的LTP不受影响，而维持期，几个小时后晚期的LTP收到了影响，哦！那么新基因的转录就对LTP的维持有重要的作用。嘿嘿，也符合记忆的体内模型。看来确实是新基因的转录对LTP，乃至学习记忆有影响。然后他们不是知道cAMP很重要吗，cAMP的直接下游就是转录因子CREB，他们马上发现CREB确实对海兔的学习很重要。但海兔太简单了，跟人差的太远。　　　　
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这时候冷泉港的一号人大展风流了一把，1994－1996年，tim tully用果蝇模型证明CREB对果蝇的学习不仅仅必要，而且充分（结果充分的证明后来被证明有很大的问题），A.Silva用小鼠模型证明CREB缺失对学习记忆有影响（这里面也有些小问题，先不说了），一下子过渡到哺乳动物了。　　　　
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公司们坐不住了，找到记忆药片还不发大了，于是kandel，和tully纷纷和加入公司，和成立公司，开始筛选记忆药物。　　　　
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说明这么多和mRNA还没扯上关系，真失败！！！　　　　
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到现在为止，人们都认为新基因的转录，尤其是CREB介导的转录，对学习记忆至关重要。一直到1995 年，另外一个研究出现了，是加州理工的Erin Schuman，发现神经元的树突中有许多mRNA，哦？（特此更正，其实并不是Schuman第一个发现树突里面有mRNA,好多年前，当mRNA刚被发现的时候，就有人无聊，用in situ去杂神经细胞，嘿，发现树突里面有很强的信号！说明树突里面有mRNA. Schuman和Kang的贡献在于第一个说明功能上的作用，其实他们的assay也挺artificial的，因为别人已经发现用神经营养因子可以刺激海马里面的神经元产生LTP，然后Schuman和Kang用翻译抑制剂，发现可以抑制BDNF诱导的LTP，严格的说跟体内情况差的远呢）

因为我们知道，信息传导的方向是神经元的树突接受信号，轴突发出信号，那么树突中有许多mRNA究竟有什么关系呢？他们接着发现，这些mRNA的翻译受神经活性的调控。　　　　

接下来的问题没有人直接提出过，但我认为很重要，那就是究竟是新基因转录对学习记忆的贡献大，还是mRNA的翻译对学习记忆的贡献大？当然很有可能是两者的结合体。
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因为对于大脑神经回路与学习记忆的关系，始终存在争论，就是，记忆究竟被存在什么地方，这是个open question，谁也不知道答案。因为神经元树突的mRNA存在给神经可塑性的调控提供了更为直接的调控方式，因为这些mRNA就在树突上，神经元的很大部分突触，也位于树突上，那么，如果神经元收到神经活性，最直接的，就是可以调控局部mRNA的转录，然后增强和减弱突触，神经回路得以增强或减弱。所有人都认为突触是神经回路被调控的方。　　　　

人们已经发现在成年动物的大脑皮层，神经元的形状根本不变了，那么变化的就肯定是局部的突触。说这个问题是因为，我现在就在做神经活性调控的基因转录机制，如果mRNA的翻译也很重要，那么硬币的另外一面可不能不注意啊。]]> 2008-12-6 5:14:00(1) dendrites 2007-3-5星期一(Monday)晴 http://blog.tianya.cn/blogger/post_show.asp?BlogID=327140&PostID=8741619&idWriter=0&Key=0 七.踏上征途

光argue不算本事，人说了，不管怎么说，我做出来了，你说这样做不行，那你说怎么办？

怎么办呢？不好办，用这种BrdU标记的方法标记的333个新神经元在经过学习记忆任务后，撑死也就才16个能表达fos。效率太低！是因为新神经元本身就很难成熟嘛？不是，这篇文章也提到BrdU标记的新神经元最后超过90％都能变成成熟的神经元可以被NeuN标记。那么就是说这个水迷宫的学习任务本身就不能在海马的dentate gyrus内激活很强的神经活性反应。在随着作者的思路，企图确定学习活动后，新的神经元和老的神经元，那个更容易发生反应（“加入空间记忆网络”中去） 之前。让我们回到问题的本源。
说到这，我有一个听上去特土的问题，如果能对学习产生反应的新神经元真是他们记录到的16个，那么这16个新神经元相对于整个海马DG区能对学习产生反应的7670个神经元，简直是沧海一粟。这16个新兵对大部队有啥影响？如果没有什么大影响，那我们折腾他们干什么？
在没有确定新生成的神经元对学习和记忆过程有什么影响之前，研究学习活动可以怎样促进新神经元整合到成熟网络中去是一个非常奇怪的问题，当然我们需要文章，研究生需要毕业，博后需要找工作，我们可以装傻，新神经元产生当然是有重要功能的了，很可能是对学习和记忆有贡献的，你敢说圣餐杯不存在嘛？
但是，如果新生成的神经元对学习和记忆，不说远的，就是如果对他们用的水迷宫检测的空间记忆没什么贡献，这个研究本身就会扔到废纸堆里去。这种可能性是50％，不会因为你长得帅而变成51%。

让我们踏上征途，看看究竟怎样来研究新神经元在成年大脑海马里的生成对学习和记忆和其他高级认知活动有没有影响。

去年4月份的时候，老蒲的得意门生之一，Song Hongjun来访问，给了一个报告，讲他们一个非常漂亮的工作。他们人为的干扰这些新生成神经元的成熟过程，发现影响发育中的一个开关后，让神经元过早成熟，结果这些早熟的新神经元不能真正的成熟而加入到成熟的神经网络中去，这里他们全是用的非常PP的电生理手段来检测神经元是否成熟，是否能够接受其他神经元的刺激，等等，比只看fos的水平令人信服多了。他给完talk之后，我就问了一个问题，能否用这个方法来研究神经干细胞在动物高级认知功能的作用？他说Fred Gage已经开始做了。

因为成年体内的新神经元生成的功能研究中一个非常重要的考虑是不能干扰正常的成熟神经元生理功能。Hongjun的研究提供了一个手段，抑制一个基因的表达NKCC1，可以使新神经元早熟而失去正常的生理功能。这个成熟过程，每一个神经元都会经过，在成体大脑内，在成熟神经元内再抑制NKCC1，应该不会有任何作用了，那么就会仅仅针对于新产生的神经元。等下，对于成熟神经元中抑制NKCC1究竟是不是按推理没有明显的影响我并不知道有没有数据支持，仅仅推理而已。
那我们就让NKCC1特异性的在成年小鼠的大脑海马区中消失！
这个时候，成熟的神经元都没事，而新产生的神经元由于失去了这个基因，会很快早熟，而不能执行正常的生理功能。然后再对小鼠，就可以想干什么干什么了，看看对学习，短期记忆，长期记忆，blah, blah, blah.
这个东西已经不是梦想了，现在的技术手段完全可以实现，本着老蒲 Ideas are cheap！的原则，我把技术上怎么实现说一下，各位谁有兴趣回去做出来，发了CNS，找到了工作，或者Nobel炸药奖，别把我忘了，虽然俺只出了主意，没啥大credit，如果Nobel lecture能提我一句，我这篇又臭又长的文章也算没白写。
首先用loxp flox NKCC1的基因，构建一个gene targeting mouse line.
第二个转基因line，或者knock in line, 设计让Cre-ER在海马DG区特异性启动子驱动下表达，现在已经有的CaMKII，synapsinI启动子都能用，不太好，prox1是海马DG区特异标记，如果能找到这种基因，做个转基因或knock in，就perfect了！基因如果是单exon的，像odorant receptor那样，内源基因都不用破坏，接一个IRES－Cre-ER就行了。小鼠长大之后，加tamoxifen诱导Cre-ER作用，在海马DG区特异性的剔除NKCC1基因，all set!


好了，我该打住了，如果有人能有耐心看到这里，我实在是非常敬佩，对于你可以忍耐这又臭又长的文章那么久，敝人非常感激。今天国内正月十五，祝各位人圆月圆，合合满满。
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--]]> 2007-3-5 2:08:00(0)